Рекомендации ЦКП [Институт химической биологии и фундаментальной медицины]
» ЦКП "Геномика" СО РАН » Научно-исследовательская работа » Секвенирование по Сэнгеру » Рекомендации ЦКП
Рекомендации ЦКП

Рекомендации ЦКП


Для получения наилучших результатов при секвенировании ДНК необходима качественная очистка реакционной смеси от невключившихся флюоресцентно меченных BigDye-ddNTP. Как правило, применяются два основных метода в разных вариантах: спиртовое осаждение и гель-фильтрация. Первая отличается простотой, но требует большей тщательности и аккуратности. Вторая отличается дороговизной фирменных колонок (Centricep Spin Columns - ~4$/шт по каталогу Princeton Separation Inc.; AutoSeq - ~2.82 Euro/шт по каталогу Amersham Pharmacia Biotech и SigmaSpin Post reaction Clean Up Columns - ~2.5$/шт, по каталогу Sigma).


Нами успешно используются два протокола очистки реакций секвенирования ДНК от невключившихся BigDye-ddNTP:

  1. гельфильтрация через приготовленные самостоятельно колонки с сорбентом Sephadex G-50 Superfine.
  2. осаждение изопропанолом.


C 2005 г. проанализировано

400343

образцов


© Copyright 2019. ИХБФМ СО РАН

Яндекс.Метрика